Dosages des cellules DC-T
Les cellules dendritiques (DC) sont des cellules présentatrices d'antigène majeures qui peuvent efficacement amorcer et amorcer de manière croisée les cellules T CD4+ et CD8+ spécifiques de l'antigène. Les tests de cellules DC-T sont utilisés pour évaluer l’immunogénicité potentielle de différentes formulations de produits qui modulent directement l’activation des cellules T.
Nos tests hautement sensibles évaluent la propension des protéines ou peptides candidats à induire des réponses immunitaires en mesurant l'activation (biomarqueurs immunitaires et cytokines) et la prolifération de cellules immunitaires pouvant conduire à des réponses antitumorales ou à l'immunogénicité du vaccin à l'aide d'un colorant CFSE et d'une analyse par cytométrie en flux.
Les DC sont différenciées in vitro à partir de monocytes CD14+ isolés en un phénotype DC immature. Ces cellules sont ensuite chargées avec la protéine ou les peptides testés avant d’induire une différenciation supplémentaire en un phénotype DC mature. Une fois matures, les cellules sont incubées avec des lymphocytes T autologues CD4+ et CD8+ avant de mesurer la prolifération des lymphocytes T, le marqueur CD25 et la sécrétion d'IL-2.
Différenciation des cellules dendritiques humaines
Evolution du phénotype cellulaire pendant 5 jours de culture.
(A) Analyse cytométrique en flux montrant que les monocytes (cellules CD14+/CD1a– au jour 0 de la culture) isolés par immunosélection négative de PBMC fraîches et cultivés avec IL-4, GM-CSF, IFNγ et LPS acquièrent un phénotype DC mature (moDC) . (B) L'expression de CD14 (marqueur monocytaire) CD1a, CD80, CD83 et HLA-DR (marqueurs DC au jour 5 de culture) ont été analysées pour suivre la différenciation en DC des monocytes isolés de donneurs sains HLA-A2pos et HLA-A2neg. .
(jour 0)
Tests de la fonction immunitaire des cellules DC-T
Representative data from DC-T cell assay
Monocyte-derived DCs (moDCs) were incubated with positive peptide (Melan-A) or negative peptide (Nucleoprotein of lymphocytic choriomeningitis virus) in order to obtain loaded mature DC (mDC). T cells from same donor (autologous) labeled with a cell tracer (CFSE) and moDCs were then co-cultured for 14 days. The proliferation and activation of specific CD8+ T cells were monitored by flow cytometry.
(1) CFSE-labeled T cells from HLA-A2pos healthy donor incubated with autologuos moDCs that were not loaded with antigen (only media), (2) CFSE-labeled T cells incubated with moDCs loaded with positive peptide (Melan-A26-35), (3) CFSE-labeled T cells incubated with moDCs loaded with with negative peptide control (NP-LCMV396-404) and (4) CFSE-labeled T cells from HLA-A2neg healthy donor incubated with moDCs loaded with positive peptide (Melan-A26-35).
Tests de polarisation des monocytes
Les monocytes sont des cellules immunitaires effectrices circulatoires très abondantes et jouent un rôle essentiel dans la conduite ou la résolution des réponses immunitaires en fonction de leur phénotype d'activation. En réponse à des stimuli présents dans leur microenvironnement local ou en circulation, les monocytes modulent l'expression de leurs gènes vers des macrophages pro-inflammatoires (M1), anti-inflammatoires (M2) ou des cellules dendritiques (DC).
Nos tests fournissent un panel de protocoles de polarisation de monocytes ou de lignées cellulaires dérivés du sang pour obtenir un régime stable, optimal et efficace pour l'induction in vitro afin de piloter des réponses immunitaires spécifiques à un antigène ou un statut immunosuppresseur. Nos protocoles permettent d'évaluer l'expression des récepteurs à la surface cellulaire, les profils de cytokines, les fonctions de récupération et la capacité à activer ou supprimer la prolifération des lymphocytes T.
Polarisation des macrophages humains
CD16-PE
CD80-PE-Cy7
CD206-BV-421
CD163-AF-647
