ANALYSE ELISPOT
Le test ELISpot (Enzyme-linked immunosorbent spot) permet de mesurer l'activation des lymphocytes T spécifiques de l'antigène. ELISpot est hautement quantitatif, peut mesurer un large éventail d’ampleurs de réponse et évaluer les activités critiques liées à l’immunité cellulaire. Dans ce test, les cellules sont cultivées sur une surface recouverte d'un anticorps de capture spécifique en présence ou en l'absence de stimuli. Les protéines, telles que les cytokines, sécrétées par les cellules seront capturées par les anticorps spécifiques présents à la surface. Le test ELISpot détecte la présence de cytokines immédiatement après la sécrétion et sa haute sensibilité le rend particulièrement utile pour les études de la petite population de cellules trouvées dans des réponses immunitaires spécifiques. La technique ELISpot ne se limite pas à la mesure des cytokines ; il convient également à presque toutes les protéines sécrétées pour lesquelles l’analyse unicellulaire est intéressante.
Les PBMC ont été isolées à partir de sang total prélevé auprès de deux donneurs auto-déclarés sains et testées en présence de contrôles positifs (PHA et LPS) pour stimuler les lymphocytes T ou les milieux seuls comme contrôle négatif en utilisant le test enzymatique ELISPOT (lecture colorimétrique) et le test FluoroSpot ( lecture de fluorescence). Les tests ont été effectués et l'expression des cytokines a été mesurée après 24 heures de stimulation par les PBMC et chaque condition a été testée en triple.
Le résultat de la lecture était un décompte ponctuel représentant la sécrétion d'IFN-γ (couleur rouge)/IL-2 (couleur bleue) pour le test enzymatique Elispot bicolore et d'IFN-γ (vert)/IL-2 (jaune)/Granzyme B (rouge). ) sécrétion pour le test fluorospot tricolore à l'aide de l'analyseur CTL ImmunoSpot S6 FluoroCore (comptes ponctuels).