The complement (C) system consists of more than 30 serum and cellular proteins, including positive and negative regulators, linked in 3 biochemical cascades, the classical, alternative and lectin pathways.
IMMUNI T offers a variety of assays to analyze activation (Immunogenicity Assays) or inhibition of complement system using quantitative assays (levels of complement components) and/or functional assays (CH50 and AP50) and we can design a custom program tailored to your specific needs
Test d'activation du complément in vitro
La compstatine, en tant qu'inhibiteur du complément dans ces tests, est un peptide ponté par disulfure de 13 résidus (ICVVQDWGHHRCT-NH2) qui se lie au C3 natif des humains et des primates non humains (NHP) et à son fragment bioactif C3b, empêchant le clivage de C3 en C3b. , et désactiver l'incorporation de C3b pour former des convertases C3/C5. Les valeurs IC50 sont de 63 μM pour CP (voie classique) et de 12 μM pour AP (voie alternative).
I) Test quantitatif
Activation du complément par les 3 concentrations de produit TI
sC5b-9 (forme soluble et non lytique du MAC) est le produit final de l'activation de l'ensemble de la cascade C et peut donc être considéré comme un indicateur direct de l'activation du C et de la production d'anaphylatoxine. Les niveaux de sC5b-9 ont été mesurés par ELISA dans les sérums de sujets sains 30 minutes après le traitement TI à 37°C. Le Zymosan utilisé comme contrôle positif a montré une fonctionnalité du complément élevée et comparable pour les sérums congelés et frais issus du sérum humain normal (NHS). Les incubations de contrôle négatif contenaient du D-PBS sans endotoxine pour évaluer les niveaux de fond.
II) Functional Assays
1) Test d'inhibition du CP50 (Effet de la compstatine sur l'activité classique du complément)
Courbe standard du parcours classique
Valeur DO
Contrôle positif (%)
III) Test d'inhibition du CH50
sC5b9 a été quantifié dans le sérum obtenu de donneurs sains. Inhibition in vitro de la production de sC5b9 par la compstatine. Des quantités croissantes de compstatine (concentrations finales de 0 à 96 μM) ont été ajoutées au NHS.
Effet de la compstatine sur l'activité classique du complément dans le test hémolytique
Inhibition de l'hémolyse médiée par la voie classique des érythrocytes de mouton sensibilisés (SRBC) dans du NHS dilué au 1/4 en présence de quantités croissantes de compstatine.
